清醒大鼠脑局部药动学研究中微透析联合HPLC法对延胡索乙素的应用分析

宰父秀曼

       延胡索乙素（THP）是科紫堇属植物延胡索的主要活性成分，又称为四氢巴马汀。具有镇痛、催眠、降低冠脉阻力及增加血流量等多个与中枢神经系统相关的药理作用，临床上应用较为广泛。目前，国内外对延胡乙素的研究多集中在体内（即血浆中）药动学研究，且其研究多采用组织匀浆的方式，但其药物治疗的作用靶部位在脑部，故对脑部药物的监测十分必要。
　　微透析具有活体连续取样、动态观察等特点，尤其适合于深部组织和器官的活体生化研究。本实验拟采用微透析技术进行清醒大鼠脑局部药动学研究，消除了麻醉状态对药物分布的影响，获得的生理参数动物正常指标，为其脑靶向制剂的研究与开发提供实验参考。
　　脑微透析探针套管的埋植及探针的植入
　　大鼠麻醉后（10％3.0ｍＬ·ｋｇ-１腹腔注射）固定在立体定位仪上，头部备皮并消毒，于头盖骨平行与矢状缝做一个２cm的中线切口，暴露头顶颅骨，分离骨膜等软组织。按照大鼠脑图谱以前卤作为定位基点，坐标为（左侧大脑）ＡＰ：+0.2ｍｍ；ＭＬ：+3.5ｍｍ；ＤＶ=-3.5ｍｍ。定位后用钻一个直径为1.2ｍｍ的小孔，刺破硬脑膜，植入带管心针的套管，而后用牙科水泥固定，保证套管不随动物的正常活动而移动或松动。待牙科水泥硬结后，往大鼠腹腔注射（８万Ｕ），在25～30 ℃条件下饲养３～４ｄ，恢复至正常的行动与饮食，外形无萎靡不振等不良手术反应。探针套管埋植成功后，将浸泡在注射液中３０min的脑探针以硬脑膜为标准向腹侧垂直插入，固定于大鼠纹状体。
　　体内回收率样品的收集与测定
　　探针植入后，用延胡索乙素质量浓度为1.1721μｇ·ｍＬ-１的 含药人工脑脊液以1.5μＬ·min-１流速灌流探针。平衡１ｈ后，每隔20min收集一次透析液样品，灌流 10ｈ，测定含药人工脑脊液和透析液样品中药物浓度，用反透析法测定延胡索乙素的体内回收率。按以下公式计算体内回收率。结果见下图。
　　延胡索乙素脑微透析探针体内回收率的稳定性
　　结果表明，当灌流液流速为1.5μＬ·min-１时，10ｈ内，脑探针中延胡索乙素体内平均回收率为32.03％，RSD为5.65％。延胡索乙素的体内回收率在10ｈ内能保持相对稳定。
　　本实验研究了清醒动物组织内游离药物浓度随时间变化趋势及其药动学参数。一般情况下，体内真正发挥作用的是游离的药物浓度，而与血浆蛋白或者其他特殊组织结合的部分只能起到药物的一种临时储库的作用。所以，本实验结果可反映组织中真正起药效作用部分的延胡索乙素的药动学特征。脑部微透析取样方法可在体评价含延胡索乙素的脑部靶向制剂，为靶向制剂的开发与临床应用提供实验参考。
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