倒置双光子显微镜助力长时程、低光损的生物观测

仪器设备品鉴官

　　常规正置显微成像设备观测离体组织、细胞培养样本时，激发光源从样本上方入射，长时间观测过程中上层光照持续作用于表层细胞，容易引发细胞活性下降、荧光探针光漂白问题，难以开展数小时连续动态观测；对于贴壁细胞、脑切片、类器官等薄层生物样本，成像深度调节空间有限，难以同步观测多层细胞交互活动。倒置双光子显微镜调整光路入射方向，搭配优化光源控制策略，适配长时间低损伤生物样本观测需求。　　设备采用倒置光路布局，物镜放置于样本承载台下方，红外双光子激发光自下而上穿透培养皿、切片基底抵达生物样本，减少光源直接照射样本表层细胞的时长与强度。双光子激发依靠非线性光学效应，仅在物镜焦点区域产生荧光激发效果，焦点以外的细胞组织不会受到有效光激发，大幅降低非观测区域细胞光照累积损伤，适合开展持续数小时甚至跨天的动态追踪实验。
　　光源功率调控模块搭载分级能量输出模式，科研人员可根据样本类型、观测时长自主调节激发光能量，观测弱荧光表达样本时适度提升能量，长期记录细胞动态时降低基础输出功率，延缓荧光探针光漂白速度，维持长时间成像过程中稳定的荧光信号。设备载物台配备恒温、换液配套组件，观测细胞、类器官样本时可维持稳定培养环境，同步完成长时间活体成像与细胞活性维持。
　　成像通道支持多色荧光同步采集，可同时标记细胞骨架、离子探针、蛋白荧光标记等多种信号，持续记录细胞分化、神经突触活动、药物刺激下细胞动态变化。物镜系列覆盖不同数值孔径规格，适配单层贴壁细胞、多层脑切片、三维类器官等不同厚度生物样本，灵活调整观测深度，捕捉多层细胞之间的信号交互过程。
　　在实际实验场景中，倒置双光子显微镜常用于体外神经细胞培养观测、脑组织离体切片环路成像、肿瘤类器官药物响应追踪等研究方向，依靠低光损伤特性获取连续完整的时序成像数据，规避短时成像只能截取片段数据的局限。稳定的长时程观测能力能够辅助科研人员追踪生物样本缓慢的生理动态变化，解析药物作用时序、细胞发育全过程等慢速生物过程，丰富体外生物样本动态成像的实验手段，支撑细胞生物学、神经药理学等细分领域的实验探索。

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